髓过氧化物酶定量检测试剂盒

产品编号	产品名称	试剂组成	包装
BCEA014	髓过氧化物酶定量检测试剂盒	标准品200μl/支	96次
		30%H2O2 200μl/支
		抑制剂1 ml/支
		浓缩底物液 200μl/支
		检测缓冲液50ml/瓶

 
产品信息：
 髓过氧化物酶中性粒细胞所特有，即使在有强吞噬作用的世噬细胞中也极少或完全没有这种酶作为中性粒细胞得到标志。其功能为将氯氧化物和氧化氢转变为次氯盐酸。在炎症状态下，它被释入细胞外液，进入循环。此酶参与含LDL的脂类氧化。
百智生物生产的髓过氧化物酶定量检测试剂盒采用原理如下：髓过氧化物酶可还原过氧化氢，与供氢体邻连茴香胺显色剂反应，产物显黄色，颜色的深浅与髓过氧化物酶的活性相关。随后通过比色法用于对组织或细胞裂解液中髓过氧化物酶进行定量检测。


保存条件：
 -20℃保存，半年有效。
 
注意事项：
     本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 
   由于样本中除髓过氧化物酶，还存在其他具有类似髓过氧化物酶活性的物质，因此每份样本均需要设定对照孔，用于测定除去髓过氧化物酶外得到其他物质活性。
 
使用说明：
1. 试剂准备：将所有试剂取出，平衡至室温使用。 
2. 样品准备：
a.组织匀浆的制备：（1）使用PH=7.4的冷PBS溶液漂洗组织，洗去所有的红细胞及血块。（2）剪碎组织，称取50mg组织加入200μl 20mM PH=7.4的冷PBS缓冲液用杜恩斯匀浆器进行组织匀浆，然后将组织匀浆放入-80℃进行细胞裂解。最后14000g 4℃离心20min。（3）吸取匀浆上清可直接加样进行检测，如果含量过高可再用PBS稀释检测。
b.细胞裂解液的制备：（1）2000g 4℃离心10min收集大约1×10⁷细胞。（2）加入1ml 20mM PH=7.4的冷PBS冰上超声，最后10000g 4℃离心10min。（3）吸取上清可直接加样进行检测，如果含量过高可再用PBS稀释检测。
3.检测工作液的配制：根据样品数量，按100体积检测缓冲液中分别加1体积100×酶浓缩底物液和100×显色液配制适量反应工作液，充分混匀，需在30min内使用。
4.在96孔板内按照下表对板孔进行编号及加样：

	空白孔	标准品孔	对照孔	样品测定孔
去离子水	200μl	200μl	/	/
标准品作液	/	/	/	/
待测样品	/	/	10μl	10μl
抑制剂	/	/	10μl	/
检测缓冲液	/	/	/	10μl
检测工作液	/	/	180μl	180μl

   按照上表加完后，将微孔板放置室温孵育，在0min和10min时将其放入酶标仪内465nm处进行读值，分别记做OD₀和OD₁₀。
5.样品中髓过氧化物酶的定量计算：
样本髓过氧化物酶（U/g total protein）=（样品孔OD_10-0 –对照孔OD_10-0）/（标准品孔OD₁₀ -空白孔OD₁₀）×标准品浓度（200U/L）×n（稀释因子）/组织匀浆或细胞裂解上清蛋白浓度（g/L）