甘油定量检测试剂盒

产品编号	产品名称	试剂组成	包装
BCBU-007	甘油定量检测试剂盒	甘油标准品（10mM）0.2ml/支	96次
		ATP 10mg/支
		100×混合酶浓缩液 0.2ml/支
		100×底物浓缩液 0.2ml/支
		检测缓冲液 50ml/瓶

 
产品信息：
Glycerol is the backbone of triglycerides, the most important storage form of fat.It is an important metabolite in energy metabolism involved in both oxidation and synthetic processes.Under various physiological or pathological conditions,triglycerides are hydrolyzed and release glycerol and free fatty acids into the blood.Unlike the free fatty acids, glycerol cannot by reutilized by adipose tissue. Glycerol is an active precursor of glucose and plays an important role in gluconeogenesis,especially during periods of caloric deprivation.
百智生物生产的甘油定量检测试剂盒原理如下图：
 
 
 
 
 
 
 

甘油在ATP和甘油酯激酶作用下生成3-磷酸甘油；接着生成的3-磷酸甘油在甘油3-磷酸氧化酶催化下生成过氧化氢。最后，过氧化物酶(POD)催化过氧化氢使色原底物生成粉色醌亚胺类化合物，颜色的深浅与甘油含量成正比。而该产物在500-520nm处有最大吸收峰，因此可以用该方法对各种动物的血清、浆、培养液和饮料等样本中的甘油进行定量。
 
保存条件：
 2-8℃保存，半年有效。
 
注意事项：
     本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 
   含有巯基的试剂如DTT和2-巯基乙醇会对试验结果产生干扰，因此样本中应避免该试剂的使用。
 
使用说明：
1.试剂准备：将所有试剂取出，平衡至室温使用。 
2.样品准备：
a.血清、浆的准备：血清和血浆可直接进行检测，如不当天检测可-20℃冻存。
b.培养液的准备：应使用不含酚红和血清的细胞培养液进行细胞培养，培养完毕超声破碎细胞后，4℃ 12000g离心5min，取上清进行测定，如不当天检测可-20℃冻存。
c.酒、饮料等澄清液体的准备：直接进行检测，超出范围可用生理盐水进行稀释。
3. 500μM工作标准品的配制：在190μl检测缓冲液中加入10μl甘油标准品（10mM），充分混匀即可。
4. ATP浓缩液的配制：吸取0.5ml检测缓冲液加入ATP管中，充分混匀溶解后备用，溶解后的ATP浓缩液-20℃可保存1个月。
5.反应工作液的配制：根据样品数量，按100体积检测缓冲液中分别加1体积ATP浓缩液、100×混合酶浓缩液和100×底物浓缩液配制适量反应工作液，充分混匀，需在30min内使用。
6. 在96孔板内按照下表对板孔进行编号及加样：

	空白管	标准品管	样品测定管
检测缓冲液	50μl	/	/
工作标准品标准品	/	5μl	/
待测样品	/	/	50
反应工作液	200μl	200μl	200μl

   按照上表加完后，将微孔板置37箱内孵育15min，到时间后取出微孔板放入酶标仪内500-520nm处处进行读值。
7.样品中甘油的定量计算：
甘油含量（μM）=（待测样品OD值-空白OD值）/（工作标准品OD值-空白OD值）×工作标准品浓度（500μM）×n（稀释因子）