丙酮酸定量检测试剂盒

产品编号	产品名称	试剂组成	包装
BCBU-009	丙酮酸定量检测试剂盒	丙酮酸标准品（10mM）0.2ml/支	96次
		100×混合酶浓缩液 0.2ml/支
		100×底物浓缩液 0.2ml/支
		检测缓冲液 50ml/瓶

 
产品信息：
丙酮酸是糖无氧化代谢的产物，研究工作者将丙酮酸和乳酸一同测定，并用二者的比值推测循环衰竭的严重程度；此外，它还对维生素B1缺乏有一定的研究意义，同事作为一种重要的精细化工中间体，广泛的用于医药、农药和食品等领域，尤其是作为医药中间体，具有良好的发展前景。
百智生物生产的丙酮酸定量检测试剂盒原理如下：丙酮酸在丙酮酸氧化酶作用下生成乙酰磷酸、二氧化碳和过氧化氢；最后，过氧化物酶(POD)催化过氧化氢使色原底物生成粉色醌亚胺类化合物，颜色的深浅与丙酮酸含量成正比。而该产物在500-520nm处有最大吸收峰，因此可以用该方法对各种动物的血清、浆、尿液等样本中的丙酮酸进行定量。
 
保存条件：
 2-8℃保存，半年有效。
 
注意事项：
     本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 
   含有巯基的试剂如DTT和2-巯基乙醇会对试验结果产生干扰，因此样本中应避免该试剂的使用。
 
使用说明：
1.试剂准备：将所有试剂取出，平衡至室温使用。 
2.样品准备：
a.血浆的准备：（1）用枸橼酸或肝素管收集全血，切忌使用EDTA管。（2）1000g 4℃离心全血10min，移液器吸取顶部的黄色血浆层，千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃。（3）血浆中的丙酮酸含量较低，可直接检测。
b.血清的准备：（1）使用不含抗凝剂的采血管收集全血， 25℃自然凝结30min。（2）2000g 4℃离心全血15min，移液器吸取顶部的黄色血清层，千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃，一个月有效。（3）血清中的丙酮酸含量较低，可直接检测。
c.尿液的制备及酸处理：（1）使用干净容器收集晨尿，如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃，一个月有效。（2）尿液中的丙酮酸含量较低，可直接检测。
3. 500μM工作标准品的配制：在190μl检测缓冲液中加入10μl丙酮酸标准品（10mM），充分混匀即可。
4.反应工作液的配制：根据样品数量，按100体积检测缓冲液中分别加1体积100×混合酶浓缩液和100×底物浓缩液配制适量反应工作液，充分混匀，需在30min内使用。
5. 在96孔板内按照下表对板孔进行编号及加样：

	空白管	标准品管	样品测定管
检测缓冲液	25μl	/	/
工作标准品标准品	/	25μl	/
待测样品	/	/	25
反应工作液	200μl	200μl	200μl

   按照上表加完后，将微孔板置37箱内孵育15min，到时间后取出微孔板放入酶标仪内500-520nm处处进行读值。
6.样品中丙酮酸的定量计算：
丙酮酸含量（μM）=（待测样品OD值-空白OD值）/（工作标准品OD值-空白OD值）×工作标准品浓度（500μM）×n（稀释因子）