过氧化氢酶定量检测试剂盒

产品编号	产品名称	试剂组成	包装
BCOS-002	过氧化氢酶定量检测试剂盒	5mM过氧化氢0.2ml/支	96次
		100×酶浓缩液 0.1ml/支
		100×底物浓缩液 0.1ml/支
		检测缓冲液 50ml/瓶

 
产品信息：
过氧化氢酶（CAT），是催化过氧化氢分解成氧和水的酶，存在于细胞的过氧化物体内。过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶, 约占过氧化物酶体酶总量的40%。过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中，特别在肝脏中以高浓度存在。
百智生物生产的过氧化氢酶定量检测试剂盒采用原理为：过氧化氢酶分解过氧化氢(H₂O₂)；然后，过氧化物酶(POD)催化过氧化氢使色原底物生成粉色醌亚胺类化合物，颜色的深浅与过氧化氢酶含量成正比。而该产物在500-520nm处有最大吸收峰，因此可以用该方法对各种动物的血清、浆、细胞与组织裂解液及尿液等样本中的过氧化氢酶进行定量。
 
保存条件：
 -20℃保存，半年有效。
 
注意事项：
     本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 
 
使用说明：
1.试剂准备：将所有试剂取出，平衡至室温使用。 
2.样品准备：
a.血浆的准备：（1）用枸橼酸或肝素管收集全血，切忌使用EDTA管。（2）1000g 4℃离心全血10min，移液器吸取顶部的黄色血浆层，千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃。（3）由于血浆中过氧化氢酶的含量较低可直接加样检测。
b.血清的准备：（1）使用不含抗凝剂的采血管收集全血， 25℃自然凝结30min。（2）2000g 4℃离心全血15min，移液器吸取顶部的黄色血清层，千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃，一个月有效。（3）由于血清中过氧化氢酶的含量较低可直接加样检测。
c.组织和细胞的准备：组织和细胞需要添加冷1×PBS进行匀浆，然后14000rpm 4℃离心5min，取上清进行测定。
3.50μM的过氧化氢工作液：在995μl检测缓冲液中加入5μl过氧化氢标准品（5mM），充分混匀即可。
4.反应工作液的配制：根据样品数量，按100体积检测缓冲液中分别加1体积100×混合酶浓缩液和100×底物浓缩液配制适量反应工作液，充分混匀，需在1小时内使用。
5.在96孔板内按照下表对板孔进行编号及加样：

	空白孔	对照孔	样品测定孔
50μM H2O2工作液	/	90μl	90μl
检测缓冲液	100μl	10μl	/
待测样品	/	/	10μl
25℃孵育30min
反应工作液	150μl	150μl	150μl

   按照上表加完后，将微孔板置25℃孵育10min，到时间后取出微孔板放入酶标仪内500-520nm处处进行读值。
6.样品中过氧化氢酶的定量计算：
样本过氧化氢酶含量（U/L）=（对照孔OD值-样品孔OD值）/（对照孔OD值-空白孔OD值）×15×n（稀释因子）
U的定义：在 pH 7.4 和 25°C 下，每分钟可以分解 1.0μmol H₂O₂，定义为1个酶活性单位