还原型谷胱甘肽定量检测试剂盒

产品编号	产品名称	试剂组成	包装
BCOS-005	还原型谷胱甘肽定量检测试剂盒	浓缩标准品0.1ml/支	96次
		蛋白沉淀剂15ml/瓶
		Ellman试剂 2×4mg/支
		反应缓冲液 15ml/瓶

 
产品信息：
谷胱甘肽是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成。存在于几乎身体的每一个细胞。谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，半胱氨酸上的巯基为其活性基团（故常简写为G-SH），易与某些药物（如扑热息痛）、毒素（如自由基、碘乙酸、芥子气，铅、汞、砷等重金属）等结合，而具有整合解毒作用。故谷胱甘肽（尤其是肝细胞内的谷胱甘肽）能参与生物转化作用，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。谷胱甘肽还能帮助保持正常的免疫系统的功能。
百智生物生产的还原型谷胱甘肽定量检测试剂盒采用改良的Ellman法，即还原型谷胱甘肽上的巯基可以与Ellman试剂反应，反应产物在碱性溶液中呈黄色，在412nm处有最大吸收峰，颜色的深浅与还原型谷胱甘肽含量成正比。因此可以用该方法对各种动物的全血和组织及细胞裂解液等样本中还原型谷胱甘肽进行定量。
 
保存条件：
 -20℃保存，半年有效。
 
注意事项：
     本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 
含有巯基的试剂如DTT和2-巯基乙醇会对试验结果产生干扰，因此样本中应避免该试剂的使用。
 
使用说明：
1.试剂准备：将所有试剂取出，平衡至室温使用。 
2.样品准备：
a.血浆的制备及去蛋白：（1）用枸橼酸或肝素管收集全血，切忌使用EDTA管。（2）1000g 4℃离心全血10min，移液器吸取顶部的黄色血浆层，千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃。（3）取120μl血浆加入干净的EP管后，再加入120μl的蛋白沉淀剂。静置10min，12000rpm 4℃ 离心5min，吸取上清用于检测。
b.血清的制备及去蛋白：（1）使用不含抗凝剂的采血管收集全血， 25℃自然凝结30min。（2）2000g 4℃离心全血15min，移液器吸取顶部的黄色血清层，千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃，一个月有效。（3）取120μl血浆加入干净的EP管后，再加入120μl的蛋白沉淀剂。静置10min，12000rpm 4℃ 离心5min，吸取上清用于检测。
c.全血的制备及去蛋白：由于全血样本中还原型谷胱甘肽含量值较高，因此需先用去离子水1:10进行稀释，然后取120μl稀释后的全血加入干净的EP管后，再加入120μl的蛋白沉淀剂。静置10min，12000rpm 4℃ 离心5min，吸取上清用于检测。
d.组织匀浆的制备及去蛋白：（1）使用PH=7.4的冷PBS溶液漂洗组织，洗去所有的红细胞及血块。（2）剪碎组织，按5ml/g组织的量加入含有1mM EDTA的50mM PH=7.0 MES缓冲液进行组织匀浆，然后10000g 4℃离心15min。（3）取120μl离心后的上清加入干净的EP管后，再加入120μl的蛋白沉淀剂。静置10min，12000rpm 4℃ 离心5min，吸取上清用于检测。
e.细胞裂解液的制备及去蛋白：（1）1000g 4℃离心10min收集大约2×10⁶个细胞（2）加入2ml的含有1mM EDTA的50mM PH=7.0 MES缓冲液进行超声破碎，然后10000g 4℃离心15min。（3）取120μl离心后的上清加入干净的EP管后，再加入120μl的蛋白沉淀剂。静置10min，12000rpm 4℃ 离心5min，吸取上清用于检测。
3.100μM 标准品作液：在495μl反应缓冲液中加入5μl浓缩标准品，充分混匀即可。
4. Ellman试剂溶解液：吸取1ml反应缓冲液加入Ellman试剂管内，充分溶解混匀后备用，需在30min内使用。
5.反应工作液的配制：根据样品数量，按50体积反应缓冲液中加1体积Ellman试剂溶解液配制适量反应工作液，充分混匀，需在1小时内使用。
6.在96孔板内按照下表对板孔进行编号及加样：

	空白孔	标准品孔	样品测定孔
去离子水	200μl
100μM标准品作液	/	200μl	/
待测样品上清	/	/	200μl
反应工作液	100μl	100μl	100μl

   按照上表加完后，将微孔板放置室温孵育25min，到时间后取出微孔板放入酶标仪内412nm处进行读值。
6.样品中还原型谷胱甘肽的定量计算：
样本还原型谷胱甘肽含量（μM）=（样品孔OD值-空白孔OD值）/（标准品孔OD值-空白孔OD值）×标准品浓度（100μM）×n（稀释因子）