脂质氧化MDA定量检测试剂盒

产品编号	产品名称	试剂组成	包装
BCOS009	脂质氧化MDA定量检测试剂盒	MDA浓缩标准品（500μM）0.2ml/支	96次
		TBA试剂 50mg /瓶
		TBA溶解试剂6ml /瓶
		TBA配制试剂6ml /瓶
		TBA酸试剂15ml/瓶

 
产品信息：
 丙二醛(MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物。动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括丙二醛。此时通过检测丙二醛的水平即可检测脂质氧化的水平，因此丙二醛的测定被广泛用作脂质氧化的指标。
百智生物生产的脂质氧化MDA定量检测试剂盒采用原理如下图：

 
 
 
 
 

丙二醛和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)反应产生红色产物的显色反应，随后通过比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中丙二醛进行定量检测。


保存条件：
 2-8℃保存，半年有效。
 
注意事项：
     本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 
 
使用说明：
1. 试剂准备：将所有试剂取出，平衡至室温使用。 
2. 样品准备：
a.血浆的制备及酸处理：（1）用EDTA或肝素管收集全血，切忌使用枸橼酸管。（2）1000g 4℃离心全血10min，移液器吸取顶部的黄色血浆层，千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃。（3）取125μl血浆加入干净的EP管后，再加入125μl的TBA酸试剂。静置10min，12000rpm 4℃ 离心4min，吸取上清用于检测，此时稀释比例为1:2。
b.血清的制备及酸处理：（1）使用不含抗凝剂的采血管收集全血， 25℃自然凝结30min。（2）2000g 4℃离心全血15min，移液器吸取顶部的黄色血清层，千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃，一个月有效。（3）取125μl血浆加入干净的EP管后，再加入125μl的TBA酸试剂。静置10min，12000rpm 4℃ 离心4min，吸取上清用于检测，此时稀释比例为1:2。
c.尿液的制备及酸处理：（1）使用干净容器收集晨尿，如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃，一个月有效。（2）取150μl尿液加入干净的EP管后，再加入150μl的TBA酸试剂。静置10min，12000rpm 4℃ 离心4min，吸取上清用于检测，此时稀释比例为1:2。
d.组织匀浆的制备及酸处理：（1）称取25mg组织放入1.5mlEP管内，加入250μl RIPA裂解液（可含蛋白抑制剂）冰上进行组织匀浆，然后1600g 4℃离心10min。（2）取150μl离心后的上清加入干净的EP管后，再加入150μl的TBA酸试剂。静置10min，12000rpm 4℃ 离心4min，吸取上清用于检测，此时稀释比例为1:2。
e.细胞裂解液的制备及酸处理：（1）1000g 4℃离心10min收集大约2×10⁷个细胞（2）加入1ml的PBS缓冲液，冰上超声破碎。（2）取150μl细胞裂解液加入干净的EP管后，再加入150μl的TBA酸试剂。静置10min，12000rpm 4℃ 离心4min，吸取上清用于检测。
f.细胞培养上清液的酸处理：取150μl细胞上清液加入干净的EP管后，再加入150μl的TBA酸试剂。静置10min，12000rpm 4℃ 离心4min，吸取上清用于检测。
3. 工作标准品的配制：使用EP管进行操作，在490μl标准品稀释液中加入10μl MDA浓缩标准品（500μM），充分混匀即为10μM，然后进行下一步稀释（建议标准曲线使用以下浓度：10μM (S5)、5μM (S4)、2.5μM (S3)、1.25μM (S2)、0.63μM (S1)、空白管（Blank）0μM为标准品稀释液。（备注：请将等体积TBA酸试剂和纯化水混匀制备标准品稀释液）

 
 
 
 
 
 

校准品浓度编号	S6	S5	S4	S3	S2	Blank
标准品稀释液（μl）	490	200	200	200	200	200
MDA工作标准品（μM）	10	5	2.5	1.25	0.63	0

 
4. MDA检测工作液的配制：依次吸取5ml的TBA溶解试剂和5ml TBA配制试剂加入TBA试剂瓶内，震荡混匀使TBA完全溶解后方可使用，未用完的工作液可-20℃稳定保存1个月。
5. 取干净的96孔板并按照下表对板孔进行编号及加样：

	系列标准品管	样品测定管
系列工作标准品	150μl	/
待测样品	/	150μl
检测工作液	100μl	100μl

   按照上表加完后，将微孔板放入酶标仪内530-540nm处进行读值，记做OD_S；将微孔板放置温箱内50℃孵育150min，到时间后取出微孔板放入酶标仪内530-540nm处进行读值，记做记做OD_T。
6.样品中脂质氧化MDA的定量计算：
1、样品和标准品OD值=OD_T-OD_S，且均需要减去标准品0μM OD值进行校正。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工或用本公司提供的软件进行4-PL标准曲线拟合。通过待测样本OD值可根据拟合方程反推出其浓度值。
2、若待测样本OD值高于标准曲线上限，应进行适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
3、若检测样本OD值≤标准品0μM（Blank）OD值时，则说明该样本中脂质氧化MDA含量低于试剂盒的最低检出限0.097μM需确定是否为样本保存不当或时间过长所致，不是则需购买更灵敏的试剂进行检测。
4、标准品4-PL拟合实例：

标准品浓度（μM）	10	5	2.5	1.25	0.63	0
ODT-S	0.944	0.490	0.266	0.151	0.095	0.039
Corrected ODT-S	0.905	0.451	0.227	0.112	0.056	0

 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 

注：以上数据和本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算待测样本中脂质氧化MDA的浓度。