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Western及IP细胞裂解液 WB005

时间:2018-01-13 12:17来源:未知 作者:admin 点击:
Western及IP细胞裂解液 100ml 240元 (货号WB005-100ml)

产品简介:

产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
WB005-100ml Western及IP细胞裂解液 100ml 240元

  Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)(Cell lysis buffer for Western and IP without inhibitors),是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可 以用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP),免疫共沉淀(co-IP),以及许多兼容1%NP-40的酶活性或者生物小分子的检测。使用本裂解液时,用户可以根 据具体用途自行添加特定抑制剂或者不添加抑制剂。
    Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)的主要成分为25mM Tris-Hcl(pH7.4),150mM NaCl,1% NP-40和5%的glycerol,同时添加了sodium orthovanadate,sodium fluoride,Sodium Pyrophosphate,Aprotinin,EDTA,leupeptin等多种磷酸酶和蛋白酶抑制剂。可有效的抑制蛋白酶和磷酸酶活性,防止蛋白降解。
    使用本裂解液获得的蛋白样品,如果用于酶活性检测或一些生物小分子的检测,需要测试标准品用本裂解液稀释后是否会显著影响标准曲线。如果本裂解液对于标准曲线无显著影响,则可以使用本裂解液。
    用Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)裂解得到的蛋白样品,可以用百智生物生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(PD-002)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的NP-40等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
包装清单:

产品编号

产品名称

包装

WB005-100ml

Western及IP细胞裂解液

100ml

说明书

1份

保存条件:
    -20℃保存,半年有效。
注意事项:
    为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
    需自备PMSF。PMSF可以向百智生物订购。
    裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
    需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
对于培养细胞样品:
1. 融解Western及IP细胞裂解液(无抑制剂),混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,
   使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干
   扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解
   液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
   对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解
   液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞
   量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于
   裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
3. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀、免疫
   共沉淀、酶或生物小分子检测等操作。
   裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适
   当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
对于组织样品:
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解Western及IP细胞裂解液(无抑制剂),混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,
   使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的
   裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫
   共沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充
   分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不
   如使用匀浆器那样裂解得比较充分。



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