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RIPA裂解液 WB006

时间:2018-01-13 12:17来源:未知 作者:admin 点击:
RIPA裂解液 100ml 240元(货号WB006-100ml)

产品简介:

产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
WB006-100ml RIPA裂解液 100ml 240元

    百智生物生产的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。
    RIPA裂解液的主要成分为:25mM Tris(pH 7.6),150mM NaCl,1% NP-40,1% sodiumdeoxycholate,0.1% SDS,同时添加了sodium orthovanadate,sodium fluoride,Sodium Pyrophosphate,Aprotinin,EDTA,leupeptin等多种磷酸酶和蛋白酶抑制剂。可有效的抑制蛋白酶和磷酸酶活性,防止蛋白降解。
 
包装清单:

产品编号

产品名称

包装

WB006-100ml

RIPA裂解液

100ml

说明书

1份

保存条件:
     -20℃保存,半年有效。
注意事项:
    为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
    裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
对于培养细胞样品:
1. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为
   1mM。
2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干
   扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解
   液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
   对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解
   液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞
   量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操
   作。
   裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可
   以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
对于组织样品:
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为
   1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的
   裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操
   作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充
   分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不
   如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组
    DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后
    续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状
    物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通
    常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。

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