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SP Mouse HRP Kit(DAB)

时间:2018-03-04 19:41来源:未知 作者:admin 点击:
SP Mouse HRP Kit 60T 268元;120T 500元

产品编号 产品名称 试剂组成 包装
SP-001 SP Mouse HRPTM Kit 3%H2O2工作液  1×3ml/瓶 3ml
正常山羊血清封闭工作液  1×3ml/瓶
Biotin Conjugated Goat Anti-Mouse IgG工作液 1×3ml/瓶
Streptavidin-HRP工作液 1×3ml/瓶
20×DAB浓缩液 1×250μl/支
DAB底物稀释缓冲液1×5ml/瓶
3%H2O2工作液  1×6ml/瓶 6ml
正常山羊血清封闭工作液  1×6ml/瓶
Biotin Conjugated Goat Anti-Mouse IgG工作液 1×6ml/瓶
Streptavidin-HRP工作液 1×6ml/瓶
20×DAB浓缩液 1×500μl/支
DAB底物稀释缓冲液1×10ml/瓶
 
产品信息:
链霉亲和素是从链霉菌中分离出的蛋白质,分子量为60 KD,穿透组织的能力比ABC,PAP复合物大,反应速度快。它含有四个亚基,每个亚基都具有与生物素(Biotin)联接的部位,且二者间有极强的亲和力,SA的等电点接近于6.5,近中性,而卵白素(Avidin)为10。因此,SA几乎不与组织中的 内源性凝集样物质发生非特异性结合,使用链霉亲和素蛋白-过氧化酶放大系统,即可产生低背景、高放大效果,经过多年来的实验应用,证明SP放大系统比传统的PAP、ABC方法更为简便、敏感、特异。百智生物的SP Mouse HRPTM Kit是根据链霉亲和素-过氧化酶(Streptavidin-Peroxidase, SP)连接系统设计的用于免疫组化实验中检测组织和细胞中抗原的高灵敏度试剂盒。
 
保存条件:
所有试剂均需2~8℃保存,半年有效。


注意事项:
1、在超过有效期的试剂盒中可能会出现一种或多种试剂活性降低,因此不得使用过期的试剂盒,且不同厂家和批号间试剂盒也不能交叉混用。
2、 如果染色背景过高,可在DAB显色之前,用加有0.01~0.02% TWEEN-20的PBST(pH= 7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后DAB显色。
3、以每张切片加入1滴(约50μl)计算,3ml可做60张切片,6ml可做120张切片。
4、对于内源性生物素含量比较丰富的组织,使用本试剂盒时最好用内源性生物素阻断
剂进行封闭。
5、DAB工作液现配现用,配制好的工作液2-8°C避光1小时内有效,且DAB为可疑致癌物
使用时请采取必要的防护措施。
6、实验过程中避免组织片干燥,因此各步孵育时工作液用量必需充足,保证完全覆盖组织
样本,且应在湿盒中进行孵育。
7、为获得最佳实验结果,请务必优化实验条件及试剂用量。
8、本产品仅用于科研,不能用于诊断或治疗。
 
使用说明:
1、组织切片或细胞爬片前处理。
a. 石蜡切片
脱蜡和水化:石蜡切片置于新鲜二甲苯中,浸泡10分钟×3次;去除多余的液体后,置于无水乙醇中,浸泡3分钟×3次;去除多余的液体后,置于95%乙醇中,浸泡3分钟×2次;去除多余的液体后,置于75%乙醇中,浸泡3分钟×2次;蒸馏水冲洗1分钟,置于PBS缓冲液中。
b. 冰冻切片和细胞爬片
切片(或爬片)浸于0.01 M pH=7.4 PBS洗涤3次×5分钟。然后用0.1%Triton X-100覆盖组织(或细胞)浸润15分钟,0.01 M pH=7.4 PBS洗涤2次×5分钟。
2、石蜡切片的抗原修复:绝大大多数情况下,石蜡组织切片用柠檬酸缓冲液高压修复都是适合的。修复液加入高压锅内,待修复切片浸于修复液中(必需没过组织),盖上压力锅盖,加热至均匀喷汽,从喷汽开始计时,1~2分钟后压力锅离开热源,自然冷却至室温,取出切片,蒸馏水淋洗后,再用PBS(0.01 M pH=7.4)漂洗2次,每次3分钟。
3、滴加适量3%H2O2工作液,室温孵育10分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性,PBS(0.01 M pH=7.4)充分淋洗3分钟×3次。
4、滴加适量正常山羊血清封闭工作液,即封闭用正常羊血清工作液,室温孵育15分钟,倾去血清,勿洗。
5、滴加适量一抗工作液,37℃孵育1~2小时或4℃过夜,PBS(0.01 M pH=7.4)充分淋洗3分钟×3次。
6、滴加适量Biotin Conjugated Goat Anti-Mouse IgG工作液,室温孵育10~15分钟,PBS(0.01 M pH=7.4)充分淋洗3分钟×3次。
7、滴加适量Streptavidin-HRP工作液,室温孵育10~15分钟,PBS(0.01 M pH=7.4)充分淋洗3分钟×3次。
8、DAB工作液配制:根据需要量,将20×DAB浓缩液和DAB底物稀释缓冲液以1:19的体积比混匀后即。
9、显色:加适量的DAB显色工作液于需要显色的组织切片或细胞爬片上即可显色,显微镜下观察控制显色时间(一般为3~10min),当达到最佳显色效果后,自来水冲洗终止显色。 如果需要,显色后的切片可经复染、脱水透明,封片后长期保存。



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