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乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase)定量测定试剂盒

时间:2018-02-25 11:08来源:未知 作者:admin 点击:
乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase)定量测定试剂盒 96T 900元(货号BCEA007-96)
乙酰胆碱酯酶定量检测试剂盒
产品编号 产品名称 试剂组成 包装
BCEA007 乙酰胆碱酯酶定量检测试剂盒 校准品(200U/L)2ml/支 96次
100×酶浓缩底物液 200μl/支
100×显色液 200μl/支
      检测缓冲液50ml/瓶
 
产品信息:
 乙酰胆碱酯酶即真性胆碱脂酶主要来自胎儿的兴奋性细胞,反应神经系统成熟度。胎儿神经管闭合缺损(如开放性脊柱裂)及开放性腹壁缺陷时,羊水中假性胆碱酯酶增加(PchE)。两者可通过同时测定羊水中PCHE活性并算出羊水ACHE/PchE比值来区分,具有很高的科研意义。
百智生物生产的总一氧化氮定量检测试剂盒采用原理如下:乙酰胆碱酯酶可水解对乙酰胆碱生成胆碱和乙酸,对胆碱可与DTNB显色剂反应,产物显黄色,颜色的深浅与乙酰胆碱酯酶的活性相关。随后通过比色法用于对血浆、血清、全血和组织或细胞裂解液中乙酰胆碱酯酶进行定量检测。


保存条件:
 -20℃保存,半年有效。
 
注意事项:
     本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 
 
使用说明:
1. 试剂准备:将所有试剂取出,平衡至室温使用。 
2. 样品准备
a.血浆的制备:(1)用EDTA或肝素管收集全血,切忌使用枸橼酸管。(2)1000g 4℃离心全血10min,移液器吸取顶部的黄色血浆层,千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存;如不,需冻存至-80℃。(3)血浆可直接加样进行检测,如果含量过高可再用生理盐水稀释检测。
b.血清的制备:(1)使用不含抗凝剂的采血管收集全血, 25℃自然凝结30min。(2)2000g 4℃离心全血15min,移液器吸取顶部的黄色血清层,千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存;如不,需冻存至-80℃,一个月有效。(3)血浆可直接加样进行检测,如果含量过高可再用生理盐水稀释检测。
c.全血准备:(1)收集全血,2-8℃保存。(2)由于全血中的乙酰胆碱酯酶活性很高,因此需用检测缓冲液1:40稀释。
d.组织匀浆的制备:(1)使用PH=7.4的冷PBS溶液漂洗组织,洗去所有的红细胞及血块。(2)剪碎组织,按5ml/g组织的量加入20mM PH=7.4 PBS缓冲液进行组织匀浆,然后10000g 4℃离心10min。(3)吸取匀浆上清可直接加样进行检测,如果含量过高可再用PBS稀释检测。
3.检测工作液的配制:根据样品数量,按100体积检测缓冲液中分别加1体积100×酶浓缩底物液和100×显色液配制适量反应工作液,充分混匀,需在30min内使用。
4.在96孔板内按照下表对板孔进行编号及加样:
  空白孔 校准品孔 样品测定孔
去离子水 200μl    
450μM标准品作液 / 200μl /
待测样品 / / 10μl
检测工作液 / /  190μl
 
   按照上表加完后,将微孔板放置室温孵育,在2min和10min时将其放入酶标仪内412nm处进行读值,分别记做OD2和OD10
5.样品中乙酰胆碱酯酶的定量计算:
血清、浆和全血乙酰胆碱酯酶(U/L)=(样品孔OD10 -样品孔OD2/(标准品孔OD10 -空白孔OD10)×标准品浓度(200U/L)×n(稀释因子)
组织乙酰胆碱酯酶(U/g total protein)=(样品孔OD10 -样品孔OD2/(标准品孔OD10 -空白孔OD10)×标准品浓度(200U/L)×n(稀释因子)/组织匀浆上清蛋白浓度(g/L)



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