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总超氧化物歧化酶(Total Superoxide Dismutase)定量测定试剂盒

时间:2018-02-25 11:12来源:未知 作者:admin 点击:
总超氧化物歧化酶(Total Superoxide Dismutase)定量测定试剂盒 96T 900元(货号BCEA011-96)
超氧化物歧化酶定量检测试剂盒
产品编号 产品名称 试剂组成 包装
BCEA-002 超氧化物歧化酶定量检测试剂盒 反应缓冲液10ml/瓶 96次
黄嘌呤氧化酶溶液1ml/支
黄嘌呤氧化酶底物溶液1ml/支
羟胺溶液1ml/支
 重氮显色剂20ml/瓶
 
产品信息:
超氧化物歧化酶(SOD),是体内清除超氧离子的重要酶类,其在血清或组织细胞中的含量改变与炎症、肿瘤、损伤和糖尿病等疾病的发生与发展及衰老过程均相关。
百智生物生产的超氧化物歧化酶定量检测试剂盒采用原理为:黄嘌呤氧化酶催化底物氧化而产生超氧离子,作用于羟胺生成亚硝基NO2-,然后与重氮试剂作用产生红色偶氮化合物。此反应系统中产生的超氧离子可被待测样品中存在的SOD清除而抑制有色化合物的生成,其抑制率与SOD的活性成正比,因此可以用该方法对各种动物的血清、浆、细胞与组织裂解液及尿液等样本中的超氧化物歧化酶进行定量。
 
保存条件:
 2-8℃保存,半年有效。
 
注意事项:
     本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 
 
使用说明:
1.试剂准备:将所有试剂取出,平衡至室温使用。 
2.样品准备:
a.血浆的制备:(1)用EDTA或肝素管收集全血,切忌使用枸橼酸管。(2)1000g 4℃离心全血10min,移液器吸取顶部的黄色血浆层,千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存;如不,需冻存至-80℃。(3)由于血浆中超氧化物歧化酶的含量较高,建议用生理盐水将其稀释2~20倍后进行检测。
b.血清的制备及酸处理:(1)使用不含抗凝剂的采血管收集全血, 25℃自然凝结30min。(2)2000g 4℃离心全血15min,移液器吸取顶部的黄色血清层,千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存;如不,需冻存至-80℃,一个月有效。(3)由于血清中超氧化物歧化酶的含量较高,建议用生理盐水将其稀释2~20倍后进行检测。
c.组织匀浆的制备:(1)用冷PBS将组织上的红细胞冲洗干净。(2)称取25mg组织放入1.5mlEP管内,加入250μl 预冷的裂解液(50mM Potassium phosphate,0.1mM EDTA,0.5% Triton X-100)冰上进行组织匀浆,然后12000g 4℃离心5min,吸取上清用于检测。如当天检测可2-8℃保存;如不,需冻存至-80℃。
d.细胞裂解液的制备及酸处理:(1)收集大约2×106个细胞,800g 4℃离心2min后弃去上清。(2)冷PBS冲洗细胞,离心后弃上清。(3)加入500μl预冷的裂解液(50mM Potassium phosphate,0.1mM EDTA,0.5% Triton X-100)重悬细胞,冰上静置10min,12000g 4℃ 离心5min,吸取上清用于检测。
3.在96孔板内按照下表对板孔进行编号及加样:
  对照孔 样品测定孔
反应缓冲液 100μl 100μl
待测样品 / 10μl
纯化水 10μl /
黄嘌呤氧化酶溶液 10μl 10μl
黄嘌呤氧化酶底物溶液 10μl 10μl
羟胺溶液 10μl 10μl
37℃孵育30min
重氮显色剂 200μl 200μl
 
   按照上表加完后,将微孔板置25℃孵育10min,到时间后取出微孔板放入酶标仪内550nm处进行读值。
4.样品中超氧化物歧化酶的定量计算:
样本超氧化物歧化酶含量(U/mL)=(对照孔OD值-样品孔OD值)/对照孔OD值×34×n(稀释因子)
 



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