糖原定量检测试剂盒

产品编号	产品名称	试剂组成	包装
BCBU-008	糖原定量检测试剂盒	糖原标准品（1.8mg/ml）0.2ml/支	96次
		水解酶 20mg/安瓿
		100×混合酶浓缩液 0.2ml/支
		100×底物浓缩液 0.2ml/支
		检测缓冲液 50ml/瓶

 
产品信息：
糖原（glycogen）（C24H42O21）是一种动物淀粉，又称肝糖或糖元，由葡萄糖结合而成的支链多糖，其糖苷链为α型。
哺乳动物体内，糖原主要存在于骨骼肌（约占整个身体的糖原的2/3）和肝脏（约占1/3）中，其他大部分组织中，如心肌、肾脏、脑等，也含有少量糖原。人体内糖原的贮存或消耗是一个受激素及底物控制的过程。通过调节参加合成及降解过程的酶的活性，机体的糖原代谢和血糖水准得到恰当的控制。糖原的不正常代谢，表现为糖原蓄积症，其原因常是由于缺乏有关的酶。例如，葡萄糖-6-磷酸酶缺乏的患者，肝及肾含有较多量结构正常的糖原，临床症状为肝肿大、极度低血糖、高脂血、高尿酸血、酮中毒以及生长停滞等。
百智生物生产的糖原定量检测试剂盒原理为糖原被特异性的酶水解为β-D-葡萄糖，接着生成的葡萄糖在葡萄糖氧化酶催化下生成过氧化氢。最后，过氧化物酶(POD)催化过氧化氢使色原底物生成粉色醌亚胺类化合物，颜色的深浅与糖原含量成正比。而该产物在500-520nm处有最大吸收峰，因此可以用该方法对各种动物的肝脏和肌肉等样本中的糖原进行定量。
 
保存条件：
 2-8℃保存，半年有效。
 
注意事项：
     本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 
   含有巯基的试剂如DTT和2-巯基乙醇会对试验结果产生干扰，因此样本中应避免该试剂的使用。
 
使用说明：
1.试剂准备：将所有试剂取出，平衡至室温使用。 
2.样品准备：
由于收集样本后，样本中的糖原依然可能会被快速的代谢掉，因此建议将收集的样本放入液氮中“闪冻”，并且在检测前的处理过程中将样本放置于冰上操作。
取300-400mg剪碎的肝脏或肌肉组织，加入2ml检测缓冲液冰上进行匀浆，然后800g 4℃离心10min，将上清转移至另干净离心管中备用。一般采用上上述方法制备的组织匀浆上清至少需要进行1:5稀释，如结果依然超出范围需提高稀释倍数，再次进行检测。
3. 200μg/ml工作标准品的配制：在160μl检测缓冲液中加入20μl糖原标准品（1.8mg/ml），充分混匀即可。
4.水解酶工作液的配制：吸取2ml检测缓冲液中加入水解酶瓶内，充分混匀即可，配置好的工作液 -20℃可保存7天。
5.反应工作液的配制：根据样品数量，按100体积检测缓冲液中分别加1体积100×混合酶浓缩液和100×底物浓缩液配制适量反应工作液，充分混匀，需在30min内使用。
6.在96孔板内按照下表对板孔进行编号及加样：

	空白管	标准品管	样品背景管	样品测定管
检测缓冲液	20μl	/	20μl	/
工作标准品标准品	/	20μl		/
待测样品	/	/	20μl	20μl
水解酶工作液	20μl	20μl	/	20μl
反应工作液	200μl	200μl	200μl	200μl

   按照上表加完后，将微孔板置37℃箱内孵育30min，到时间后取出微孔板放入酶标仪内500-520nm处处进行读值。
7.样品中糖原的定量计算：
糖原含量（μg/ml）=（样品测定管OD值-样品背景管OD值）/（工作标准品OD值-空白OD值）×工作标准品浓度（200μg/ml）×n（稀释因子）