总抗氧化物定量检测试剂盒

产品编号	产品名称	试剂组成	包装
BCBU-011	总抗氧化物定量检测试剂盒	水溶性维生素E标准品（5mg） 1支	96次
		试剂A液 2×10ml/瓶
		试剂B液 400μl /支
		标准品与样品稀释液 50ml/瓶

 
产品信息：
   Antioxidants play an important role in preventing the formation of and scavenging of free radicals and other potentially toxic oxidizing species. There are three categories of antioxidant species: enzyme systems (GSH reductase, catalase, peroxidase, etc.), small molecules (ascorbate, uric acid, GSH, vitamin E, etc.) and proteins (albumin, transferrin, etc.). Different antioxidants vary in their reducing power. Trolox is used to standardize antioxidants, with all other antioxidants being measured in Trolox equivalents. Measurement of the combined nonenzymatic antioxidant capacity of biological fluids and other samples provides an indication of the overall capability to counteract reactive oxygen species (ROS), resist oxidative damage and combat oxidative stress-related diseases.
百智生物生产的总抗氧化物定量检测试剂盒采用原理如下：样本中的抗氧化物可将Cu²⁺还原为Cu⁺，生成的Cu⁺可与底物络合形成紫色的复合物，而该产物在560~570nm处有最大吸收峰，因此可以用该方法对各种动物的血清、浆、尿液和唾液等样本中的总抗氧化物进行定量。
 
保存条件：
 2-8℃保存，半年有效。
 
注意事项：
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 
EDTA等金属螯合剂会严重干扰最终结果，因此血浆管中的抗凝剂可选择枸橼酸三钠和肝素，而不能使用EDTA。
 
使用说明：
1.试剂准备：将所有试剂取出，平衡至室温使用。 
2. 样品准备：
a.血浆的准备：（1）用枸橼酸或肝素管收集全血，切忌使用EDTA管。（2）1000g 4℃离心全血10min，移液器吸取顶部的黄色血浆层，千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃，一个月有效。（3）由于血浆中的总抗氧化物含量较高，因此血浆需用样品稀释液1:4稀释。
b.血清的准备：（1）使用不含抗凝剂的采血管收集全血， 25℃自然凝结30min。（2）2000g 4℃离心全血15min，移液器吸取顶部的黄色血清层，千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃，一个月有效。（3）由于血清中的总抗氧化物含量较高，因此血清需用样品稀释液1:4稀释。
c.尿液的准备：（1）使用干净的容器采集新鲜尿液。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃，一个月有效。（2）由于尿液中的总抗氧化物含量很高，因此需用样品稀释液1:10稀释。
d.唾液的准备：（1）使用干净的容器采集新鲜唾液。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃，一个月有效。（2）由于唾液中的总抗氧化物含量较高，因此需用样品稀释液1:2稀释。
3.标准品的复溶及配制：加入2ml注射水至标准品管内，充分混匀使其完全溶解，此时管内标准品浓度为1mM，然后用标准品与样品稀释液进行下一步稀释（建议标准曲线使用以下浓度：1mM (S4)、0.5mM (S3)、0.25mM (S2)、0.125mM (S1) 、0mM（Blank）为标准品与样品稀释液。复溶后的标准品-20℃保存可稳定一周。
 
 
 
 
 
 

校准品浓度编号	S4	S3	S2	S1	Blank
标准品稀释液（μl）	2000	125	125	125	125
工作标准品（mM）	1	0.5	0.25	0.125	0

 
4.反应工作液的配制：根据样品数量，按50体积试剂A加1体积试剂B配制适量反应工作液，充分混匀，配制好的反应工作液应在1小时内用完。
 
5.在96孔板内按照下表对板孔进行编号及加样：

	标准品孔	样品测定孔
样品稀释液	/	/
总抗氧化物标准品	20μl	/
待测样品	/	20μl
反应工作液	200μl	200μl

    按照上表加完后，将微孔板放置室温孵育5min，到时间后取出微孔板放入酶标仪内560~570nm处进行读值。
6.样品中总抗氧化物的定量计算：
1、样品和标准品OD值均需要减去标准品0mM OD值进行校正。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工或用软件进行直线标准曲线拟合。通过待测样本OD值可根据拟合方程反推出其浓度值。
2、若待测样本OD值高于标准曲线上限，应进行适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
3、若检测样本OD值≤标准品0mM（Blank）OD值时，则说明该样本中脂质氧化MDA含量低于试剂盒的最低检出限0.018mM需确定是否为样本保存不当或时间过长所致，不是则需购买更灵敏的试剂进行检测。
4、标准品直线拟合实例：

标准品浓度（mM）	1	0.5	0.25	0.125	0
OD	0.897	0.486	0.257	0.162	0.054
Corrected OD	0.843	0.432	0.203	0.108	0

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

注：以上数据和本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算待测样本中总抗氧化物的浓度。