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Mouse Granzyme B ELISA Kit

时间:2016-10-27 05:00:52来源:本站 作者:admin 点击:244次


【项目简介】
Granzyme B 属于丝氨酸蛋白酶Granzyme家族,他们特异性存在于细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK)的细胞毒素颗粒中,作为两种主要的细胞毒性淋巴细胞(CL),CTL和NK是针对细胞内病原体和转化细胞天然和获得性免疫关键组成细胞。Granzyme B通过CL分泌颗粒组分在胞外释放,同时在穿孔素辅助下,能进入目标细胞基质中引发细胞死亡,由于它在颗粒介导的凋亡中必不可少,在针对细菌和病毒感染过程中Granzyme B可能发挥重要作用。在基质中Granzyme B能识别的指标包括caspases,BID,核纤层蛋白,多聚(ADP-核糖)聚合酶、神经元谷氨酸受体和人软骨蛋白聚糖等。小鼠的Granzyme B与人的Granzyme B氨基酸序列同源性分别为68%。一旦进入毒素颗粒中,Granzyme B能完全进入成熟链并且成为一个活性蛋白酶,其活性能被丝氨酸蛋白酶抑制剂B9抑制。
 
【检验原理】
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。酶标微孔板上预包被有抗小鼠Granzyme B抗体,当加入标准品和待测样本时,重组或天然的小鼠Granzyme B会和该抗体结合。洗板后,游离的其他成分被洗去,加入生物素化的抗小鼠Granzyme B抗体可与被酶标板捕获的小鼠Granzyme B结合。再次洗板后,游离的其他成分被洗去,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素,生物素和链霉亲和素特异性结合,形成“包被抗小鼠Granzyme B抗体+小鼠Granzyme B+生物素化抗小鼠Granzyme B抗体+链霉亲和素-HRP”免疫复合物。当加入TMB显色底物后,复合物上连接的HRP催化底物反应,生成蓝色产物,终止反应后变为黄色。在450nm处测定OD值,小鼠Granzyme B浓度与OD450值之间呈正比,可通过绘制标准曲线求出标本中小鼠Granzyme B的浓度。


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