乙酰胆碱酯酶定量检测试剂盒

产品编号	产品名称	试剂组成	包装
BCEA007	乙酰胆碱酯酶定量检测试剂盒	校准品（200U/L）2ml/支	96次
		100×酶浓缩底物液 200μl/支
		100×显色液 200μl/支
		检测缓冲液50ml/瓶

 
产品信息：
 乙酰胆碱酯酶即真性胆碱脂酶主要来自胎儿的兴奋性细胞，反应神经系统成熟度。胎儿神经管闭合缺损（如开放性脊柱裂）及开放性腹壁缺陷时，羊水中假性胆碱酯酶增加（PchE）。两者可通过同时测定羊水中PCHE活性并算出羊水ACHE/PchE比值来区分，具有很高的科研意义。
百智生物生产的总一氧化氮定量检测试剂盒采用原理如下：乙酰胆碱酯酶可水解对乙酰胆碱生成胆碱和乙酸，对胆碱可与DTNB显色剂反应，产物显黄色，颜色的深浅与乙酰胆碱酯酶的活性相关。随后通过比色法用于对血浆、血清、全血和组织或细胞裂解液中乙酰胆碱酯酶进行定量检测。


保存条件：
 -20℃保存，半年有效。
 
注意事项：
     本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 
 
使用说明：
1. 试剂准备：将所有试剂取出，平衡至室温使用。 
2. 样品准备：
a.血浆的制备：（1）用EDTA或肝素管收集全血，切忌使用枸橼酸管。（2）1000g 4℃离心全血10min，移液器吸取顶部的黄色血浆层，千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃。（3）血浆可直接加样进行检测，如果含量过高可再用生理盐水稀释检测。
b.血清的制备：（1）使用不含抗凝剂的采血管收集全血， 25℃自然凝结30min。（2）2000g 4℃离心全血15min，移液器吸取顶部的黄色血清层，千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃，一个月有效。（3）血浆可直接加样进行检测，如果含量过高可再用生理盐水稀释检测。
c.全血准备：（1）收集全血，2-8℃保存。（2）由于全血中的乙酰胆碱酯酶活性很高，因此需用检测缓冲液1:40稀释。
d.组织匀浆的制备：（1）使用PH=7.4的冷PBS溶液漂洗组织，洗去所有的红细胞及血块。（2）剪碎组织，按5ml/g组织的量加入20mM PH=7.4 PBS缓冲液进行组织匀浆，然后10000g 4℃离心10min。（3）吸取匀浆上清可直接加样进行检测，如果含量过高可再用PBS稀释检测。
3.检测工作液的配制：根据样品数量，按100体积检测缓冲液中分别加1体积100×酶浓缩底物液和100×显色液配制适量反应工作液，充分混匀，需在30min内使用。
4.在96孔板内按照下表对板孔进行编号及加样：

	空白孔	校准品孔	样品测定孔
去离子水	200μl
450μM标准品作液	/	200μl	/
待测样品	/	/	10μl
检测工作液	/	/	190μl

   按照上表加完后，将微孔板放置室温孵育，在2min和10min时将其放入酶标仪内412nm处进行读值，分别记做OD₂和OD₁₀。
5.样品中乙酰胆碱酯酶的定量计算：
血清、浆和全血乙酰胆碱酯酶（U/L）=（样品孔OD₁₀ -样品孔OD₂）/（标准品孔OD₁₀ -空白孔OD₁₀）×标准品浓度（200U/L）×n（稀释因子）
组织乙酰胆碱酯酶（U/g total protein）=（样品孔OD₁₀ -样品孔OD₂）/（标准品孔OD₁₀ -空白孔OD₁₀）×标准品浓度（200U/L）×n（稀释因子）/组织匀浆上清蛋白浓度（g/L）