产品简介：

产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
WB005-100ml	Western及IP细胞裂解液	100ml	240元

  Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)(Cell lysis buffer for Western and IP without inhibitors)，是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可 以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)，免疫共沉淀(co-IP)，以及许多兼容1%NP-40的酶活性或者生物小分子的检测。使用本裂解液时，用户可以根 据具体用途自行添加特定抑制剂或者不添加抑制剂。
    Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)的主要成分为25mM Tris-Hcl(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40和5%的glycerol，同时添加了sodium orthovanadate，sodium fluoride，Sodium Pyrophosphate，Aprotinin，EDTA，leupeptin等多种磷酸酶和蛋白酶抑制剂。可有效的抑制蛋白酶和磷酸酶活性，防止蛋白降解。
    使用本裂解液获得的蛋白样品，如果用于酶活性检测或一些生物小分子的检测，需要测试标准品用本裂解液稀释后是否会显著影响标准曲线。如果本裂解液对于标准曲线无显著影响，则可以使用本裂解液。
    用Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)裂解得到的蛋白样品，可以用百智生物生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(PD-002)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的NP-40等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
WB005-100ml	Western及IP细胞裂解液	100ml
—	说明书	1份

保存条件：
    -20℃保存，半年有效。
注意事项：
    为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
    需自备PMSF。PMSF可以向百智生物订购。
    裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
    需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
对于培养细胞样品：
1. 融解Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，
   使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干
   扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解
   液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
   对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解
   液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞
   量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于
   裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀、免疫
   共沉淀、酶或生物小分子检测等操作。
   裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适
   当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，
   使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的
   裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫
   共沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充
   分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不
   如使用匀浆器那样裂解得比较充分。