超氧化物歧化酶定量检测试剂盒

产品编号	产品名称	试剂组成	包装
BCEA-002	超氧化物歧化酶定量检测试剂盒	反应缓冲液10ml/瓶	96次
		黄嘌呤氧化酶溶液1ml/支
		黄嘌呤氧化酶底物溶液1ml/支
		羟胺溶液1ml/支
		重氮显色剂20ml/瓶

 
产品信息：
超氧化物歧化酶（SOD），是体内清除超氧离子的重要酶类，其在血清或组织细胞中的含量改变与炎症、肿瘤、损伤和糖尿病等疾病的发生与发展及衰老过程均相关。
百智生物生产的超氧化物歧化酶定量检测试剂盒采用原理为：黄嘌呤氧化酶催化底物氧化而产生超氧离子，作用于羟胺生成亚硝基NO₂^-，然后与重氮试剂作用产生红色偶氮化合物。此反应系统中产生的超氧离子可被待测样品中存在的SOD清除而抑制有色化合物的生成，其抑制率与SOD的活性成正比，因此可以用该方法对各种动物的血清、浆、细胞与组织裂解液及尿液等样本中的超氧化物歧化酶进行定量。
 
保存条件：
 2-8℃保存，半年有效。
 
注意事项：
     本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 
 
使用说明：
1.试剂准备：将所有试剂取出，平衡至室温使用。 
2.样品准备：
a.血浆的制备：（1）用EDTA或肝素管收集全血，切忌使用枸橼酸管。（2）1000g 4℃离心全血10min，移液器吸取顶部的黄色血浆层，千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃。（3）由于血浆中超氧化物歧化酶的含量较高，建议用生理盐水将其稀释2~20倍后进行检测。
b.血清的制备及酸处理：（1）使用不含抗凝剂的采血管收集全血， 25℃自然凝结30min。（2）2000g 4℃离心全血15min，移液器吸取顶部的黄色血清层，千万不要碰触影响到白色至浅黄色的薄层。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃，一个月有效。（3）由于血清中超氧化物歧化酶的含量较高，建议用生理盐水将其稀释2~20倍后进行检测。
c.组织匀浆的制备：（1）用冷PBS将组织上的红细胞冲洗干净。（2）称取25mg组织放入1.5mlEP管内，加入250μl 预冷的裂解液（50mM Potassium phosphate，0.1mM EDTA，0.5% Triton X-100）冰上进行组织匀浆，然后12000g 4℃离心5min，吸取上清用于检测。如当天检测可2-8℃保存；如不，需冻存至-80℃。
d.细胞裂解液的制备及酸处理：（1）收集大约2×10⁶个细胞，800g 4℃离心2min后弃去上清。（2）冷PBS冲洗细胞，离心后弃上清。（3）加入500μl预冷的裂解液（50mM Potassium phosphate，0.1mM EDTA，0.5% Triton X-100）重悬细胞，冰上静置10min，12000g 4℃ 离心5min，吸取上清用于检测。
3.在96孔板内按照下表对板孔进行编号及加样：

	对照孔	样品测定孔
反应缓冲液	100μl	100μl
待测样品	/	10μl
纯化水	10μl	/
黄嘌呤氧化酶溶液	10μl	10μl
黄嘌呤氧化酶底物溶液	10μl	10μl
羟胺溶液	10μl	10μl
37℃孵育30min
重氮显色剂	200μl	200μl

   按照上表加完后，将微孔板置25℃孵育10min，到时间后取出微孔板放入酶标仪内550nm处进行读值。
4.样品中超氧化物歧化酶的定量计算：
样本超氧化物歧化酶含量（U/mL）=（对照孔OD值-样品孔OD值）/对照孔OD值×34×n（稀释因子）